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发布者：四川莱博瑞实验设备有限公司 发布时间：2020-06-03 15:02:43 阅读：0
PCR（Polymerase Chain Reaction）技术作为重要的基因工程技术，应用于基因工程学科的研究、技术开发等。核酸检测PCR实验室，也称核酸检测基因扩增实验室，在医院、实验室、药厂等行业得到了广泛引用。新型冠状病毒（2019-nCoV，其正式分类名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2，severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2）肆虐期间，通过在PCR实验室将病毒所含基因进行扩增，测出感染者体内是否含有特定的病毒，核酸检测PCR实验室对于新冠肺炎患者的确诊，发挥了关键作用。同时，也对PCR实验室的改（扩）建提出了迫切需求。
PCR实验室平面布局
临床基因扩增检测实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配置和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区—标本制备区—扩增反应混合物配置和扩增区—扩增产物分析区。
实验室空调通风系统设计及压力控制
1.试剂贮存和准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。 2.标本制备区 该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、储存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。 本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。 3.扩增反应混合物配制和扩增区 该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA（来自样本制备区）的加入和主反应混合液（来自试剂贮存和制备区）制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。 本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶在本区漏出，为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要走动。个别操作如加样等应在超净工作台内进行。 4.扩增产物分析区 该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。 本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。 污染的预防和控制 PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的有以下几种污染类型：扩增产物的污染；天然基因组DNA的污染；试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力。因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。 1.工作区域的严格划分 （1）各个实验区域设置合理； （2）各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地面颜色等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。 2.合理的系统设置 （1）合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统； （2）严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求。 3.规范的操作 （1）临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，经培训合格后才能从事临床基因扩增检验工作； （2）在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。此外，操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施； （3）清洁工作及时、正确。实验工作结束后，必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯照射消毒外，对一些实验设备还应进行高压消毒处理。 4.严格的管理 （1）严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室，有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门； （2）在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服（如不同颜色），当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其他区域； （3）尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性； （4）扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等； （5）扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质，应特别注意实验人员的安全防护。 5.完备的实验室配套设施 完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件，应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器，如超净工作台、离心机、加样器等。
